王镜岩《生物化学》考研题库问答题80道
1．简要说明影响氧化磷酸化的因素。
答:①氧化磷酸化主要受细胞对能量需求的调节。ATP的生成必须以电子传递为前提，而ADP的积累刺激呼吸链的活动从而增加磷酸化，反之氧化磷酸化减慢。②甲状腺激素可激活许多细胞膜上
酶，加速ATP分解为ADP和
，促进氧化磷酸化。③呼吸链抑制剂抑制电子的传递。氧化磷酸化抑制剂不仅抑制呼吸也抑制磷酸化；解偶联剂虽不抑制呼吸，电子虽可传递但不偶联磷酸化，这些抑制物都是抑制氧化磷酸化作用的因素。④线粒体DNA编码涉及氧化磷酸化作用的10余条多肽，其突变也可影响氧化磷酸化作用。
2．试比较DNA与RNA的分子组成、分子结构、细胞内主要分布及生理功能不同分工与联系。
答:DNA含A、G、C、T和脱氧核糖，大多为双螺旋，主要分布在核内；RNA含A、G、C、U和核糖，单链(局部可有双螺旋)，主要在胞浆。DNA是遗传物质载体，编码合成RNA，RNA是遗传信息的传递者，参与蛋白质生物合成，但一些病毒是作为遗传物质载体。
3．什么是氨中毒？试述尿素的合成及意义。
答:氨中毒指在严重肝脏疾病时，机体的氨生成过多而肝脏对氨的清除能力降低，因而血氨水平显著升高，增高的血氨经血脑屏障进入脑组织，从而引起脑功能障碍。
尿素合成:又称为鸟氨酸循环，是肝脏中2分子氨(1分子氨是游离的，1分子氨来自天冬氨酸)和1分子C02生成1分子尿素的环式代谢途径。
(1)尿素循环不仅将氨和
合成为尿素，而且生成1分子延胡索酸，使尿素循环与柠檬酸循环联系起来。
(2)肝脏中尿素的合成是除去氨毒害作用的主要途径，尿素循环的任何一个步骤出问题都有可能产生疾病。如果完全缺乏尿素循环中的某一个酶，婴儿在出生不久就昏迷或死亡；如果是部分缺乏，引起智力发育迟滞、嗜睡和经常呕吐。在临床实践中，常通过减少蛋白质摄入量使轻微的高氨血遗传性疾病患者症状缓解，原因就是减少了游离氨的来源。
(3)植物体内也存在尿素循环，但转运活性低，其意义在于合成精氨酸。个别植物也可产生尿素，在脲酶作用下分解产生氨，用以合成其他含氮化合物，包括核酸、激素、叶绿体、血红素、胺、生物碱等。
4．何为同源重组,位点特异性重组以及跳跃子介导的DNA重组？扼要说明三种DNA重组方式在机制上的差异。
答:(1)同源重组发生在DNA的同源序列之间，真核生物的非姊妹染色单体的交换，细菌的转化、转导和接合，噬菌体的重组都属于这种类型。同源重组要求较大的DNA片段进行交换，它们的序列相同或接近相同。
(2)位点特异性重组是直接在两个DNA分子的专一序列之间配对而发生的重组，两个DNA分子并不交换对等的部分，有时是一个DNA分子整合到另一个DNA分子中，如噬菌体基因组整合到细菌染色体中的过程。重组只需要有限的同源序列，但必须有位点专一性的蛋白质因子参与催化。由于这些蛋白质因子不能催化其他任意两条同源或非同源DNA配对之间的重组，因而保证了该重组的高度专一性和保守性。
(3)跳跃子介导的DNA重组即转座重组。转座子是可移动的DNA片段，转座过程中转座元件从染色体的一个位点跳跃到另一个位点，这与转座子同受体DNA分子之间的同源性无关，只需要在转座酶和复制相关的酶的催化下即抗完成。
(4)三种DNA重组方式在机制上的差异如下：
同源重组依赖于同源区的存在。在真核生物中，重组发生于四分体期；原核生物的同源重组依赖rec基因(recA、recB、recC、recD)的产物，即RecA蛋白和RecBCD蛋白。
位点特异性重组的过程与噬菌体的特异性DNA序列有关，包括一小段同源序列，参与此过程的酶仅作用于一对特殊的靶序列。因此，这种重组过程中，不仅需要同源序列，而且同时需要位点特异性蛋白因子参与催化，但不需要RecA蛋白的参与。由于这些蛋白质因子不能催化其他任意两条同源或非同源DNA片段之间的重组，因而保证了该重组的高度专一性和保守性，所以这类重组又被称为保守重组。
转座重组属于异常重组。重组发生在序列不相同的DNA分子之间，即一段DNA序列插入另一段DNA序列之中，不需要依赖任何序列的同源性，也不需要RecA蛋白的参与。
5．用简单的词句解释下列名词：
(1)酶原
(2)多酶复合体
(3)同工酶
(4)全酶
(5)米氏常数
(6)别构效应
(7)催化部位
(8)结合部位
(9)溶酶体
(10)线粒体
答:(1)酶原——是活性酶的前体，经激活后，除去了一些肽段，使酶原的结构发生了变化，结果呈现出酶的活性。
(2)多酶复合体——在机体内，经常有一系列的酶以特定的方法组合在一特定的位点，协同地完成某一个生化反应。这些酶的组合体即是多酶复合体，或称多酶复合物。
(3)同工酶——一些结构有所不同，但是具有相同活性的酶分子，被称为同工酶。
(4)全酶——通常将一些除了含有肽链外、还有其他非肽性质的组分，而且经这两部分组合后形成的具有完整催化活性产物被定义为全酶。
(5)米氏常数——当酶反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度称为米氏常数，这是每一个酶的特征参数。
(6)别构效应种分子可以通过分子内某一部分的结构改变，而导致分子活性改变的现象，即别构效应，也可称为变构效应。经常研究的例子是酶的别构效应，然而除了酶以外，血红蛋白等也有别构效应。
(7)催化部位——酶分子中参与和引起底物结构发生变化的部位。
(8)结合部位——酶分子中参与和底物结合的部位。
(9)溶酶体——是细胞中的一种细胞器，在细胞内的主要功能是负责各类生物大分子的降解。它和高尔基体、质膜的内吞密切相关。
(10)线粒体——是细胞中和能量代谢密切有关的一种细胞器。三羧酸循环、脂肪酸氧化，以及氧化磷酸化、电子传递和ATP合成均和线粒体相关。
6．比较真核生物与原核生物转录起始的第一步有什么不同？
答:细菌中，DNA指导的RNA聚合酶核心酶由4个亚基
(
)
组成，核心酶与
亚基结合产生全酶。核心酶可以催化NTP的聚合，但只有全酶才能够引发转录的开始。主要的步骤是:具有特异识别能力的
亚基识别转录起始点上游的启动子特异同源序列，这样可以使全酶与启动子序列结合力增加，形成封闭的二元复合物。关键的作用是RNA聚合酶与DNA的相互作用。真核生物中，当含
TBP(
)
的转录因子与DNA相互作用时，其他因子也结合上来，形成起始复合体，这一复合体再与RNA聚合酶结合，因此主要是RNA聚合酶与蛋白质之间的作用。
7．核苷酸是细胞合成核酸的原料，在核苷酸的合成过程中，细胞通过何种方式来调节不同核苷酸量的平衡？试分析之。
答:(1)嘌呤核苷酸的调节。从头合成是体内合成嘌呤核苷酸的主要途径。但此过程要消耗氨基酸及ATP。机体对合成速度有着精细的调节。在大多数细胞中，分别调节IMP、ATP和GTP的合成，不仅调节嘌呤核苷酸的总量，而且使ATP和GTP的水平保持相对平衡。
IMP途径的调节主要在合成的前两步反应，即催化PRPP和PRA的生成。核糖磷酸焦磷酸激酶受ADP和GDP的反馈抑制。磷酸核糖酰胺转移酶受到ATP、ADP、AMP及GTP、GDP、GMP的反馈抑制。ATP、ADP和AMP结合酶的一个抑制位点，而GTP、GDP和GMP结合另一抑制位点。因此，IMP的生成速率受腺嘌呤和鸟嘌呤核苷酸的独立和协同调节。此外，PRPP可变构激活磷酸核糖酰胺转移酶。
第二水平的调节作用于IMP向AMP和GMP转变过程。GMP反馈抑制IMP向XMP转变，AMP则反馈抑制IMP转变为腺苷酸代琥珀酸，从而防止生成过多AMP和GMP。此外，腺嘌呤和鸟嘌呤的合成是平衡的。GTP加速IMP向AMP转变，而ATP则可促进GMP的生成，这样使腺嘌呤和鸟嘌呤核苷酸的水平保持相对平衡，以满足核酸合成的需要。
(2)嘧啶核苷酸的调节。在细菌中，天冬氨酸氨基甲酰转移酶(ATCase)是嘧啶核苷酸从头合成的主要调节酶。在大肠杆菌中，ATCase受ATP的变构激活，而CTP为其变构抑制剂。而在许多细菌中，UTP是ATCase的主要变构抑制剂。
8．表示出体内利用果糖合成糖原的途径。
答:在体内果糖不能直接用于合成糖原，首先要转变为果糖-6-磷酸，再经果糖-1-磷酸的作用，变成葡萄糖-1-磷酸
(
)
。然后，
。UDPG才是合成糖原时的葡萄糖供体。
近年在糖原合成研究中的一个重要进展是糖原蛋白(glycogenin)的发现。实验表明，糖原中的第一个葡萄糖基是在酶的作用下，由UDPG转移到这个蛋白质的酪氨酸侧链的羟基上，而后再是糖链的延伸。
9．在搏斗或逃逸时，肾上腺素的释放促进肝、心肌和骨骼肌中的糖原降解，在肝脏中糖原降解的终产物是葡萄糖，而在骨骼肌中的终产物是丙酮酸。请回答以下问题：
(1)为什么糖原在这两种组织中会生成不同的终产物？
(2)有机体在搏斗或逃逸时，具有这两种不同的糖原降解途径的优越性是什么？
答:(1)心肌和骨骼肌缺少葡萄糖-6-磷酸酶，所以糖原降解生成的葡萄糖-6-磷酸都进入到酵解途径，在缺氧条件下经丙酮酸转化为乳酸。
(2)磷酸化的中间产物不能从细胞中逃逸，因为带电的分子不能穿过细胞膜。在搏斗或逃逸时为了使肌肉具有活力需要高浓度的酵解前体物质。另外，肝应当释放葡萄糖以便维持血糖水平。葡萄糖可以由葡萄糖-6-磷酸形成，然后从肝细胞输送到血液中。
10．蔗糖合成的两条途径。
答:(1)途径一：蔗糖合成酶催化途径。在蔗糖合成酶催化下利用UDPG作为葡萄糖供体与果糖合成蔗糖。
途径二：磷酸蔗糖合成酶催化途径。在磷酸蔗糖合成酶催化下利用UDPG作为葡萄糖供体与6-磷酸果糖生成磷酸蔗糖，再经专一的磷酸酯酶作用脱去磷酸形成蔗糖。
11．简述蛋白质的定量测定方法的类别和胶体金测定的原理。
(1)物理性质:紫外分光光度法、折射率法、比浊法。
(2)化学性质:凯氏定氮法、双缩脲比色法、
酚法、BCA法。
(3)染色性质:考马斯亮蓝
结合法、银染、金染。
(4)其他:荧光激发、胶体金比色法。胶体金是一种带负电荷的疏水性胶体，加入蛋白质后，红色的胶体金溶液转变为蓝色，其颜色的改变与加入的蛋白质量有定量关系，可在595nm处测定样品的吸收值，计算含量。
12．一种叫做FP的十肽，具有抗肿瘤活性。请根据下面的信息推导该肽的氨基酸顺序。
(1)完整的FP经一轮Edman降解，每摩尔FP可产生2mol的PTH-Asp;
(2)取一份FP溶液，用β巯基乙醇处理后，接着用胰蛋白酶处理，产生具如下氨基酸组成的3个肽:(Ala，Cys，Phe)、(Arg，Asp)、(Asp，Cys，Gly，Met，Phe)，完整的(Ala，Cys，Phe)肽经一轮Edman降解产生PTH-Cys;
(3)lmolFP用羧肽酶处理产生2mol的Phe;
(4)完整的(Asp，Cys，Gly，Met，Phe)肽用溴化氰处理，产生具(同型丝氨酸内酯，Asp)和(Cys，Gly，Phe)组成的两个肽，该(Cys，Gly，Phe)肽在第一轮Edman降解中产生PTH-Gly。
答:(1)该信息表明FP是由两条肽链组成，且每条肽链的N端残基是Asp。
(2)该信息表明FP含有二硫键，胰蛋白酶处理产生的二肽的顺序应该是
，三肽的顺序是Cys-(Ala，Phe)，五肽的顺序是Asp-(Cys，Gly，Met，Phe)。由于二肽和三肽都是胰蛋白酶催化产生的，因此这两个肽的顺序是
(Ala
，Phe)。
(3)羧肽酶给出的信息表明FP的每条肽链的C端残基都是Phe，因此胰蛋白酶催化产生的五肽的顺序是Asp-(CyS，Gly，Met)-Phe，另5个残基的顺序必定是Asp-Arg-Cys-Ala-Phe。
(4)根据溴化氰处理胰蛋白酶催化产生的五肽Asp-(Cys，Gly，Met)-Phe所给出的信息，表明所产生的两个肽的顺序分别是Asp-Met和(Cys，Gly)-Phe；由于三肽的N端是Gly，故这个三肽的顺序是Gly-Cys-Phe。于是五肽的顺序是
：。
由此，整个FP的氨基酸顺序是：
13．简述草酰乙酸在糖代射中的重要作用。
答:草酰乙酸在糖代谢中的氧化和糖异生中起重要作用：①糖氧化产生的乙酰辅酶A要与草酰乙酸缩合成柠檬酸进入三羧酸循环；②糖异生途径的丙酮酸不能逆行生成磷酸烯醇式丙酮酸，要先羧化为草酰乙酸，再经磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶催化生成磷酸烯醇式丙酮酸。因此草酰乙酸不仅可异生为糖，而且其他非糖物质(乳酸、生糖氨基酸等)均要转变为草酰乙酸才能异生为糖。
14．比较脂肪酸生物合成与氧化的区别。
答:脂肪酸的合成并非氧化途径的简单的逆反应，而是由全新的一套反应所组成的，大致有如下区别：①脂肪酸合成在胞液中进行，而氧化则在线粒体基质中进行；②脂肪酸合成的中间产物是共价连接在酰基载脂蛋白(ACP)上的巯基，而脂肪酸氧化的中间产物是连接在辅酶A的巯基上；③在高级动物，脂肪酸合成的酶系是在单一一条多肽链上，称为脂肪酸合酶的多功能酶，而氧化的酶是单个的多酶系.不是多功能酶；④脂肪酸逐步加长，每次两个碳原子来自乙酰CoA,但激活的二碳单位是丙二酰ACP(经丙二酰CoA)；推动这步反应的是释放
；⑤脂肪酸合成的还原剂是NADPH，而氧化所需是
和FAD；⑥脂肪酸合成到软脂酸
(
)
为止，进一步增长要其他酶执行，而氧化则是在脂肪酸激活后只一套酶就可进行到底。
15．
质粒含有
(
四环素抗性)和
(
氨苄青霉素抗性)基因，在构建重组子时插入失活
后，若有下述情况，质粒分别可能处于什么样的状态？
A.有
和
表现型的菌落；
B.有
和
表现型的菌落；
C.有
和
表现型的菌落；
(其中
：对氨苄青霉素敏感；
：对四环素敏感)
答:当构建的重组子转化大肠杆菌以后，由于外源基因插入
基因中而导致
基因不能表达，转化的大肠杆菌在含四环素的培养基上不能生长，而
基因并没有受到破坏，在含氨苄青霉素的培养基上仍可生长。A:有
和
表现型时，表明质粒未连接外源基因;B:有
和
表现型的菌落，外源基因正常插入质粒中的
基因；C:有
和
表现型，无论外源基因有否插入质粒中的
基因，质粒都未转化大肠杆菌。
16．简述
磷酸葡萄糖的代谢途径。
答:6-磷酸葡萄糖途径有来源和去路两方面。它的来源是：①葡萄糖位磷酸化，由己糖激
酶或葡萄糖激酶催化，消耗ATP；②由糖原分解产生的
磷酸葡萄糖经磷酸葡萄糖变位酶转变为
磷酸葡萄糖；③由非糖物质异生成磷酸果糖后经磷酸己糖异构酶催化异
构为
磷酸葡萄糖。
磷酸葡萄糖的去路是：①经糖酵解生成乳酸；②糖有氧氧化生成
、
和ATP；③在磷酸葡萄糖脱氢酶催化脱氢后进入磷酸戊糖途径；④经变
位酶转变为磷酸葡萄糖，合成糖原。
17．参与真核生物核糖体循环的蛋白质因子有哪些？主要有何作用？
答:核糖体循环即蛋白质生物合成，其3个阶段各有所需的蛋白质因子。①起始需要很多种起始因子，有
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
和
等，均参与起始复合物的形成，相互间反应相当复杂。②延长需要
协助氨基酰
进入A位，
协助移位和卸载
的释放。③终止需要释放因子(RR)促进肽链从核糖体水解下来，而核糖体因子(RR)是将
从核糖体释放下来。
18．已知用限制性内切核酸酶
和
酶切以后可分别产生黏性末端序列
和平末端序列
(1)若这两个酶均识别
序列，分别写出这两个酶的识别序列。
(2)如果一个载体被
和
完全酶切以后，需要重新形成
结构，可采用什么方法？
答:
(1)
识别序列为
；
识别序列为
。
(2)可采用的方法有:①利用一段带有
和
酶切位点适宜长度的双链DNA片段，用这两种酶酶切以后再与已经切开的载体连接，即可成为
NA
结构;②将
切开的地方用
片段补平，然后用连接酶进行平端连接，也可获得cccDNA，但效率较低。
19．真核生物成熟mRNA的结构特点及各结构的功能是什么？
答:mRNA分子带有蛋白质编码信息，在翻译中起模板作用。真核生物成熟mRNA主要由以下几部分组成。
(1)
端帽子结构:是mRNA翻译起始的必要结构，为核糖体小亚基提供识别位点；增加mRNA的稳定性，保护mRNA免遭
外切核酸酶的降解；并在成熟转录产物的出核运输过程中发挥重要作用。
(2)
端polyA尾结构:可能与mRNA从细胞核向细胞质的转运有关，对真核mRNA的翻译效率具有一定作用，并能稳定mRNA结构，保持一定的生物半衰期。
(3)开放读码框(ORF):mRNA上从起始密码子AUG至终止密码子之间的核苷酸序列称为ORF，读码框内每3个碱基组成一个三联体密码，决定一个氨基酸，编码蛋白质的氨基酸序列。
(4)
端和
端非翻译序列:mRNA上位于ORF上游和下游的序列，不翻译成蛋白质，但参与翻译的调控。
20．列举5个具有治疗作用的酶药物。
答:常见的具有治疗作用的酶药物
21．蛋白质有哪些重要功能？
答:蛋白质是生命活动的体现者。具有催化作用(酶)；调节作用(免疫球蛋白)；运输作用(血红蛋白)；贮存作用；作为结构成分等。蛋白质也可作为能量的来源、氮源、提供缓冲效应和体液渗透压。
22．氰化物为什么能引起窒息死亡？其解救机理是什么？
答:氰化钾的毒性是因为它进入人体内时，
的N原子含有孤对电子能够与细胞色素
的氧化形式——高价铁
以配位键结合成氰化高铁细胞色素
，使其失去传递电子的能力，阻断了电子传递给
，结果呼吸链中断，细胞因窒息而死亡。而亚硝酸在体内可以将血红蛋白的血红素辅基上的
氧化为
。部分血红蛋白的血红素辅基上的
被氧化成
——
高铁血红蛋白，且含量达到
时，高铁血红蛋白
(
)
也可以和氰化钾结合，这就竞争性抑制了氰化钾与细胞色素
的结合，从而使细胞色素
的活力恢复；但生成的氰化高铁血红蛋白在数分钟后又能逐渐解离而放出
。因此，如果在服用亚硝酸的同时，服用硫代硫酸钠，则
可被转变为无毒的
，此硫氰化物再经肾脏随尿排出体外。
23．
是如何作为第二信使在细胞间信息转导中发挥作用的？
答:胞外信号分子与靶细胞质膜受体结合，经
激活磷脂酶C，后者水解质膜中的4，
二磷酸磷脂酰肌醇
(
)
生成1，4，
三磷酸肌醇
(
)
和二脂酰甘油(DAG)，这两个第二信使分子，将胞外信号转换为胞内信号，激活了
和
双信号系统。
通过作用于内质网膜上的
门控
通道而引起
从内质网内释放至胞浆中，胞浆中
浓度骤升，启动胞内的
信号系统，通过钙调蛋白(CaM)造就一定的细胞效应。至于DAG因其脂溶性而留在质膜双层的内层，其下游的靶蛋白是蛋白激酶C(PKC)，后者是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，存在细胞液中，当
引发
浓度升高，
与PKC结合后转位到质膜内表面而被DAG激活，可产生多种生理效应如分泌、肌肉收缩等短效应或细胞增殖、分化等长效应。
24．何谓酮体？酮体生成有何生理意义？简要叙述酮体是如何生成及氧化利用的。
答:(1)酮体是指脂肪酸在肝脏线粒体内分解时产生的特有的中间产物，包括乙酰乙酸、
羟丁酸和丙酮。
(2)酮体生成的生理意义:①酮体是脂肪酸在肝内正常的中间代谢物，是肝输出能源的一种形式。②长期饥饿、糖供应不足时可以代替葡萄糖，成为脑组织及肌肉的主要能量来源。
(3)酮体是在肝细胞内由乙酰CoA在
合酶的催化下经
转化而来，但肝脏不利用酮体。在肝外组织酮体经乙酰乙酸硫激酶或琥珀酰CoA转硫酶催化后，转变成乙酰CoA并进入三羧酸循环而被氧化利用。
25．真核生物转录前水平的基因调节主要有哪些方式？
答:真核生物转录前水平的基因调节方式主要有如下几种：
(1)染色质丟失。某些低等真核生物，如蛔虫，在其发育早期卵裂阶段，所有分裂的细胞除一个之外，均将异染色质部分删除掉，从而使染色质减少约一半，而保持完整基因组的细胞则成下一代的生殖细胞，在此加工过程中DNA发生了切除并重新连接。
(2)基因扩增。即通过改变基因数量而调节基因表达产物的水平。基因扩增是细胞短期内大量产生出某一基因拷贝从而适应特殊需要的一种手段。某些脊椎动物的昆虫的卵母细胞，为贮备大量核糖体以供卵细胞受精后发育的重要，通常都要专一性地增加编码核糖体RNA的基因。
(3)基因重排。基因组序列发生改变，较常见的是失去一段特殊序列，或是一段序列从一个位点转移到另一个位点。重排可使表达的基因发生切换，由表达一种基因转为表达另一种基因。例如，单倍体酵母配对型的转换。
(4)染色体DNA的修饰和异染色质化。DNA的碱基可被甲基化，主要形成
甲基胞嘧啶
(
)
和少量
曱基腺嘌呤
(
)
。在生物发育和分化过程中，DNA甲基化作用能引起染色质结构、DNA构象、DNA稳定性以及与蛋白质相互作用方式的改变，从而控制基因的表达。凝缩状态的染色质称为异染色质，为非活性转录区。真核生物通过异染色质化而关闭某些基因的表达，如雌性哺乳动物细胞有两个X染色体，其中一个高度异染色质化而永久性失去活性，通常染色质的活性转录区无或很少甲基化，非活性区则曱基化程度高。
26．简述载脂蛋白的分类和主要作用。
答:载脂蛋白是脂蛋白中的蛋白质部分，按发现的先后主要分为A、B、C、D、E等五类。其主要作用有:①结合和转运脂质及稳定脂蛋白的结构。②识别脂蛋白受体。③调节血浆脂蛋白代谢关键酶的活性。如载脂蛋白C-2能激活脂蛋白脂酶，促进乳糜微粒及极低密度脂蛋白的分解代谢；载脂蛋白C-3能抑制脂蛋白脂酶。载脂蛋白
能激活卵磷脂-胆固醇转酰基酶，催化卵磷脂分子中
位的脂酰基转移至胆固醇
位羟基生成溶血卵磷脂及胆固醇酯，促进高密度脂蛋白成熟及胆固醇的转运。载脂蛋白D促进胆固醇酯及甘油三酯在极低密度脂蛋白、低密度脂蛋白与高密度脂蛋白之间的转运，因而也称脂质转运蛋白。
27．试述下列因素如何影响DNA的复性过程。①阳离子的存在；低于
的温度；③高浓度的DNA链。
答:①阳离子可以中和DNA中带负电荷的磷酸基团，减弱DNA链间的静电作用，促进两条互补的多核苷酸链的相互靠近，从而促进DNA的复性；②温度升高可使DNA变性，因此温度降低到熔点以下可以促进DNA的复性；③DNA链的浓度增加可以加快互补链随机碰撞的速度，从而促进DNA的复性。
28．关于
的DNA聚合酶Ⅰ，试回
答:
(1)其
外切酶的作用是什么？
(2)在
的整个复制过程中，其
的外切核酸酶活性的功能是什么？
答:(1)DNA聚合酶Ⅰ的
核酸外切酶活性
能切除单链DNA的端核苷酸，而对双链DNA不起作用，故不能形成碱基对的错配核苷酸可被该酶水解下来。在DNA的复制过程中，一旦出现错配碱基时，聚合反应立即停止，生长链的
端核苷酸落入
外切酶位点，错配核苷酸迅速被除去，然后聚合反应才得以继续下去。因此，
外切酶活性被认为起校对的功能。
(2)在
的整个复制过程中，其
的外切核酸酶活性可切除DNA半不连续合成中冈崎片段
端的RNA引物。
29．下列符号所代表的糖类化学名称分别是什么。
A.
B.
C.
D.
E.
F.
G.
答:A.葡萄糖
B.岩藻糖
C.半乳糖；
D.
乙酰氨基胞壁酸
E.
乙酰氨基葡萄糖
F.
乙酰氨基半乳糖
G.葡萄糖
磷酸
30．试说明DNA双螺结构模型的要点。
答:(1)两条反向平行的多核苷酸链围绕同一中心轴缠绕，形成一个右手的双螺旋。一条链上的碱基通过氢键与另一条链上的碱基连接，形成碱基对。G与C配对，A与T配对(碱基互补)，G和C之间可以形成三个氢键，A和T之间形成两个氢键。
(2)交替的脱氧核糖和带负电荷的磷酸基团骨架位于双螺旋的外侧，糖环平面几乎与碱基平面成直角。两条链上的嘌呤碱基与嘧啶碱基堆积在双螺旋的内部，由于它们的疏水性和近似平面的环结构而紧密叠在一起，碱基平面与螺旋的长轴垂直。
(3)双螺旋的平均直径为2nm，相邻碱基对的距离为0.34nm，相邻核苷酸的夹角为
。 沿螺旋的长轴每一转含有10个碱基对，其螺距为3.4mn。
(4)由于碱基对的堆积和糖-磷酸骨架的扭转，导致螺旋的表面形成两条不等宽的沟。宽的、深的沟称为大沟；窄的、浅的称之小沟。
(5)弱的相互作用稳定双螺旋DNA。影响双螺旋DNA稳定性的主要作用力是碱基堆积力、氢键和离子键。
31．试以磺胺为例阐明竞争性抑制的特点及磺胺抑菌的作用机制。
答:竞争性抑制剂与底物的结构近似，与底物竞争和酶的活性中心结合，增大底物浓度可降低抑制程度，其抑制特点是
增加，
不变。磺胺结构和对氨基苯甲酸(PABA)近似，而PABA是一些细菌合成二氢叶酸(DHF)的原料，因此磺胺与PABA竞争和二氢叶酸合成酶的活性中心结合，DHF合成受抑制。细菌不能直接利用叶酸合成四氢叶酸(核苷酸合成中的一种辅酶)而要由PABA经二氢叶酸合成酶催化合成二氢叶酸，再经还原酶还原为四氢叶酸。因此磺胺类药抑制细菌生长。
32．什么是逆转座子？有什么特征？
答:逆转座子是转座过程中需要由RNA为中介，通过DNA新转录为RNA，又反转录成DNA进行转座。
逆转座子的整体结构与整合的反转录病毒极为相似，其主要特征之一是在两端具有长的同向末端重复序列(long terminal repeats，LTR)，而两个末端的每一个末端又各具一个倒转重复序列。LTR主要携带有转录起始和终止信号以满足转录及转录后的RNA作为中介通过反转录完成转座的需要。逆转座子含有内部编码区，编码与反转录病毒的种群专一性抗原和多蛋白类似的蛋白质。与反转录病毒的主要区别在于它不具备编码外壳蛋白的env基因，因而不具备感染力。根据内部编码区中内切酶编码区和反转录酶编码区的位置不同，提出将植物逆转座子划分为两组：一组的编码区顺序和反转录病毒非常相似，其内切酶编码区在反转录酶区的下游端，如百合的dellh和松树的IFG7等因子就属于这一组，这一组逆转座子称为
型；另一组内切酶编码区在反转录酶编码区的上游端，如小麦的
、拟南芥的Tal、烟草的Tntl以及马铃薯的Tstl，这一组称为
型。
33．有这么一个广告，说某厂生产的一种补品含有17种氨基酸，其中有几种是必需氨基酸等。你读了这一广告，有何感想？
答:这一广告不科学。首先对人体有营养保健作用的物质是多方面的，仅有氨基酸并不是对任何人都有效果的。其次，仅就氨基酸而论，人体必需的氨基酸只有8种(L，I，V，M，T，K，W，F)，另外2种(H，R)是半必需的，即在某些情况和某些条件下是大量需要的。因此，补品中所谓的17种氨基酸，对人体可能起到作用的只有其中的一半。再者，人体所需的氨基酸的含量在这17种氨基酸中占的比例对这补品的价值也是至关重要的。
34．已知一蛋白质有：-Trp-Met-Asp-Trp-Gly-序列。为了合成一个12核苷酸长度的探针，用于检测该蛋白质的基因，因此由上述序列推测：
(1)该蛋白质的mRNA序列
(2)该蛋白质的负链DNA序列
(3)该蛋白质的正链DNA序列
(4)12核苷酸长度的探针序列
答:(1)
(2)
(3)
(4)探针：
。
35．脂类物质在生物体内主要起哪些作用？
答:脂类(lipids)泛指不溶或微溶于水而易溶于乙醚、氯仿、苯等非极性有机溶剂的各类生物分子，一般由醇和脂肪酸组成。醇包括甘油(丙三醇)、鞘氨醇、高级一元醇、固醇等类型;脂肪酸分为饱和脂肪酸与不饱和脂肪酸两类。脂类物质在生物体内主要作用包括以下几点。
(1)能量储存形式。三酰甘油主要分布在皮下、胸腔、腹腔、肌肉、骨髓等处的脂肪组织中，是储备能源的主要形式。三酰甘油作为能源储备具有可大量储存、功能效率高、占空间少等优点，三酰甘油还有绝缘保温、缓冲压力、减轻摩擦振动等保护功能。
(2)参与生物膜的构成。磷脂、糖脂、胆固醇等极性脂是构成人体生物膜的主要成分。它们构成生物膜的水不溶性液态基质，决定了生物膜的基本特性。膜的屏障、融合、绝缘、脂溶性分子的通透性等功能都是膜脂特性的表现，膜脂还给各种膜蛋白提供功能所必需的微环境。脂类作为细胞表面物质，与细胞的识别、种特异性和组织免疫等有密切关系。
(3)有些脂类及其衍生物具有重要的生物活性。例如，肾上腺皮质激素和性激素的本质是类固醇;各种脂溶性维生素是不可皂化脂;介导激素调节作用的第二信使有的也是脂类，如二酰甘油、肌醇磷脂等;前列腺素、血栓素、白三烯等具有广泛调节活性的分子是20碳酸衍生物。
(4)有些脂类是生物表面活性剂。磷脂、胆汁酸等双溶性分子或离子，能定向排列在水-脂或水-空气两相界面，有降低水的表面张力的功能，是良好的生物表面活性剂。例如，肺泡细胞分泌的磷脂覆盖在肺泡壁表面，能通过降低肺泡壁表面水膜的表面张力，防止肺泡在呼吸中萎陷。缺少这些磷脂时，可造成呼吸窘迫综合征，患儿在呼吸后必须用力扩胸增大胸内负压，使肺泡重新充气。又如胆汁酸作为表面活性剂，可乳化食物中脂类，促进脂类的消化吸收。
(5)作为溶剂。一些脂溶性的维生素和激素都是溶解在脂类物质中才能被吸收，它们在体内的运输也需要溶解在脂类中，如维生素A、维生素E、维生素K、性激素等。
36．区别三羧酸循环中氧化磷酸化与底物水平磷酸化ATP生成方式的不同。
答:三羧酸循环有4次脱氢，3次生成NADH和1次生成
；NADH氧化磷酸化生成3个
ATP,
则生成2个ATP。总共11个ATP,都是氧化磷酸化生成的。另外，在
酮戊二酸氧化脱羧生成的是琥珀酰
，含有高能硫酯键，可以经底物水平磷酸化生成琥珀酸和GTP，后者可再转变为ATP。
37．简述受体
蛋白
效应蛋白型受体的结构与功能作为药物作用的生物化学基础。
答:真核细胞中鸟苷三磷酸
结合蛋白(简称G蛋白)在联系细胞膜受体与效应蛋白质中起着重要介导作用。G蛋白含
、
、
三种亚基。
亚基是GDP或GTP结合位点，又具有GTP酶活力。
、
亚基对
亚基起调节作用。在基础状态，亚基结合GDP，并与
、
亚基构成无活性三聚体。当受体与激素结合后，受体被激活，活化受体与G蛋白相互作用，使
G
蛋白释出GDP，并立即结合GTP。结合GTP后的G蛋白改变构象使其与激素
受体复合体分离，并降低激素与受体的亲和力，使二者解离。同时G蛋白的
亚基与
、
亚基解离，游离的
亚基
对效应蛋白起调节作用，如激活腺苷酸环化酶，催化ATP生成cAMP或激活磷脂酶C，催化磷脂酰肌醇
，5-二磷酸生成二脂酰甘油(甘油二酯)及三磷酸肌醇(IP3)。最后G蛋白的
亚基将CTP水解成GDP并释放出Pi，结合GDP的
亚基与
、
亚基亲和力高，所以与效应蛋白解离，重新与
、
亚基结合成三聚体。
38．请写出：(1)完整线粒体内从NADH至
这段呼吸链的组成顺序；(2)产生偶联ATP合成的部位；(3)三个作用于这段呼吸链不同部位的抑制剂的名称及作用点。
答:(1)NADH→(NADH脱氢酶)→辅酶Q→细胞色素
b+
(
辅酶Q-细胞色素c氧还酶)→细胞色素c→(细胞色素氧化酶)→氧。
(2)偶联部位：NADH-辅酶Q；还原辅酶Q-细胞色素c氧还酶；细胞色素c→氧。
(3)抑制剂：鱼藤酮(阻断NADH→辅酶Q的电子传递)；抗霉素A(抑制细胞色素b→细胞色素
的电子传递)；氰化物(抑制细胞色素
→
的电子传递)。
39．简述酶工程的概念及其主要研究范畴。
答:酶工程就是将酶或者微生物细胞、动植物细胞、细胞器等在一定的生物反应装置中，利用酶所具有的生物催化功能，借助工程手段将相应的原料转化成有用物质并应用于社会生活的一门科学技术。它包括酶制剂的制备、酶的固定化、酶的修饰与改造及酶反应器等方面内容。酶工程的应用主要集中于食品工业、轻工业及医药工业中。
40．何谓转录？简述转录与复制的异同点？
答:生物体内在DNA指导的RNA聚合酶催化下，以DNA为模板，以4种NTP为原料，按碱基配对原则合成RNA的过程称为转录。
RNA的转录合成从化学角度来讲类似于DNA的复制，二者都是酶促的核苷酸聚合过程，都以DNA为模板，都须依赖DNA的聚合酶，多核苷酸链的合成都是以
的方向，在
末端与加人的核苷酸形成磷酸二酯键，均遵从碱基配对规律。但是，由于复制和转录的目的不同，二者又各具特点:①对于一个基因组来说，转录只发生在一部分基因，而且每个基因的转录都受到相对独立的控制；而复制则是发生于整个基因组的。②RNA的转录合成是以DNA的一条链为模板而进行的，所以这种转录方式又称不对称转录；而复制则是两条链均作为模板。③转录的原料是NTP，而复制则是dNTP。④催化转录的是RNA聚合酶，该酶缺乏
外切酶活性，所以没有校正功能。复制则是由DNA聚合酶催化的，该酶具有校正功能。⑤转录时不需要引物，而且RNA链的合成是连续的；复制需要引物，且后随链的合成是不连续的。⑥转录的碱基配对为
，而复制则是
。⑦转录产物是各种RNA，复制产物为子代双链DNA。
41．什么是生物转化作用？生物转化的化学反应有哪些类型，可作为结合剂的物质主要有哪些？
答:机体对许多内源性、外源性非营养物质进行代谢转化，改变其极性，使其易随胆汁和尿液排出的过程称为生物转化，生物转化主要在肝脏进行，少量在肠黏膜、肺、腎等组织进行。
反应类型包括：①第一相反应：氧化，还原和水解反应；②第二相反应：结合反应。
可作为结合剂的物质主要包括：葡萄糖醛酸、硫酸、乙酰基、甲基、谷胱甘肽、氨基酸等。
42．基因治疗可采用哪些方法？各有何利弊？
答:基因治疗可有下列路线：①基因矫正，将异常基因修理至正常；②基因置换，是用芷常基因替换异常基因。以上两种理想方法因技术原因还不能实行。③基因增补，如将合适的靶细胞在体外进行增殖，将外源基因导人细胞内并使之表达，然后再将含有外源基因的细胞回输病人体内，使外源基因在体内表达，达到治疗目的。这是目前使用较多的方法，方法较可行但也难于控制其表达及表达程度。④基因失活，这是采用各种方法抑制或破坏某种基因的表达，以达到治疗的目的。常用反义RNA、干扰
RNA(
)
等。这种技术操作较易进行，但确切效果有待观察。
43．请回答1mol软脂酸彻底氧化分解，产生多少摩尔ATP?
答:软脂酸经7次
氧化，则生成8个乙酰CoA、7个
和7个
。乙酰CoA在三羧酸循环中氧化分解，一个乙酰CoA生成10个ATP，所以
。7个
经呼吸链氧化可生成
；
经呼吸链氧化可生成
，三者相加。减去软脂酸活化消耗掉2个ATP，实得
。
44．遗传密码有什么特点？
答:遗传密码的特点有：①连续性：指阅读编码一个蛋白质
时从起始密码子开始每3个碱基(三联体)从
端读至终止密码子是连续的，中间不跳过碱基，同时也不重读碱基，因此，
上失去或插入碱基，若非3个或3的倍数，在碱基改变的下游所编码氨基酸就大乱了。②简并性：指一种氨基酸可有不止1个密码子，实际上只有2种氨基酸(
和
)只含1个密码子，其他氨基酸含2个、3个、4个或6个密码子。③通用性：指原核和真核生物共用同一套密码，虽然线粒体用的略有差异。④摆动性：指
反密码子与
上的密码子的相配不严格遵守
和
配对，实际只是反密码子的第1个碱基和密码子第3个碱基的摆动：G可配C或U；U可配A或G；I可配C、A或U。这种摆动性可节约一个细胞中所需
品种。例如若按严格的配对，丝氨酸有6个密码子，要有6种丝氨酸
，有摆动性则只有3种即可，实际上大肠杆菌就只有3种
。
45．试述酶的米氏常数的特点及重要意义。
答:酶的米氏常数
是酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度。当ES解离为E和S的速度大大超过分解为E和P的速度时，
近似于ES的
，在此条件下，
可用以表示酶对底物的亲和力：
愈小，亲和力愈大；
愈大，亲和力愈小。
是酶的特性常数之一，与酶的结构、酶所催化的底物(如同一种酶有几种底物就有几个
值)和外界环境(如
、温度、离子种类等)有关，与酶的浓度无关。因在不同的可逆性抑制作用中，
值可不变、増大或减小，从而可鉴别出抑制的类型。在体内多酶体系催化的连续代谢中，可根据各个酶的
寻找限速酶或调节酶，因
值最大者常为催化限速步骤的酶。
46．蛋白质分离纯化技术是蛋白质研究和制备的一项重要技术。简单说明凝胶色谱法、离子交换色谱和亲和色谱法的分离纯化原理。
答:(1)凝胶色谱法的分离纯化原理:以多孔凝胶(如葡萄糖、琼脂糖、硅胶、聚丙烯酰胺等)作固定相，依据样品分子质量大小达到分离目的。大分子不进入凝胶孔洞，沿多孔凝胶胶粒间隙流出，先被洗脱;小分子进入大部分凝胶孔洞，在柱中滞留，后被洗脱。根据样品性质分类:凝胶过滤(GFC)用于分析水溶性样品，如多肽、蛋白、生物酶、寡聚核苷酸、多聚核苷酸、多糖。凝胶渗透(GPC)用于分析脂溶性样品，如测定高聚物的分子质量。
(2)离子交换色谱法分离纯化原理:离子交换色谱(ion exchange chromatography，IEC)以离子交换树脂作为固定相，树脂上具有固定离子基团及可交换的离子基团。当流动相带着组分电离生成的离子通过固定相时，组分离子与树脂上可交换的离子基团进行可逆变换。根据组分离子对树脂亲和力不同而得到分离。
(3)亲和色谱法分离纯化原理:将一对能可逆结合和解离生物分子的一方作为配基(也称为配体)，与具有大孔径、亲水性的固相载体相偶联、制成专一的亲和吸附剂，再用此亲和吸附剂填充色谱柱，当含有被分离物质的混合物随着流动相流经色谱柱时，亲和吸附剂上的配基就有选择地吸附能与其结合的物质，而其他的蛋白质及杂质不被吸附，从色谱柱中流出，使用适当的缓冲液使被分离物质与配基解吸附，即可获得纯化的目的产物。
47．生物氧化与非生物氧化的有哪些异同点？
答:相同点:①反应的本质相同，脱氢、失电子、加氧;②被氧化物质相同；③总终产物和释放的能量相同。
不同点:①生物氧化在酶的催化下进行，因此条件温和；②生物氧化能量逐步释放；③生物氧化的主要方式是脱氢；④生物氧化可以被多种因素调控。
48．举例说明酶的活性是怎样测定的。
答:酶活性测定，即是酶反应初速度的测定。简单地说，是在一定条件下，测定产物的增加或是底物的减少。可以根据产物和底物的各种理化性质，选择其中一个进行测定。然后，以时间为横坐标，以产物或底物量的变化为纵坐标作图。与最初一段时间所相适应的曲线的斜率即可代表酶的活性。
49．写出草酰乙酸参加的代谢循环的名称和意义。
答:草酰乙酸参加的代谢循环：①三羧酸循环，它既是糖、脂类、蛋白质代谢为
和水，并供能的主要通路，也是三大物质相互转变的枢纽；②草酰乙酸经转氨基作用生成天冬氨酸，参与鸟氨酸循环，合成尿素排出体外，解除氨的毒性；③草酰乙酸转变为天冬氨酸后参与肌肉的嘌呤核苷酸循环，是肌肉脱氨基的主要途径。
50．试述RNA生物合成的一般步骤及真核mRNA的成熟加工过程。
答:(1)RNA生物合成分两类：①在DNA指导下的RNA合成，即转录；②在RNA指导下的RNA合成，即RNA复制。转录是以DNA为模板，在4种核糖核苷酸和
存在下，由依赖DNA的RNA聚合酶催化生成RNA。原核的依赖DNA的RNA聚合酶是一种多亚基酶，它催化产生所有的RNA；真核的依赖DNA的RNA聚合酶有三类，分别催化得到不同类别的RNA。DNA模板上除了启动子和终止子外，还存在许多顺式作用元件，它们分别与许多反式作用因子(蛋白质)相互作用，进行转录调控。
(2)真核mRNA的成熟加工过程有：剪接除去内含子、
端连上帽子结构、3＇端接上多聚(A)、RNA编辑产生新密码子等。
51．蛋白质变性过程中，有哪些现象出现？并举出三种能引起蛋白质变性的试剂。
答:蛋白质的变性过程，通常总是伴随着有序结构的破坏和生物活性的丧失。有序结构的破坏包括了亚基间的解离、二级和三级结构的改变，多数情况是肽链的松散，原来包埋在内部的残基(主要是疏水性残基)的暴露。活性丧失，除了和配体的结合能力的丧失，还有抗原性的改变。极端的
、尿素和盐酸胍等破坏氢键的试剂和不同类型的去垢剂都是能引起蛋白质变性的试剂。
52．论述参与原核生物DNA复制过程所需的物质及其作用。
答:①DNA双螺旋，作为子代DNA双螺旋的亲代提供模板；②DnaA、DnaB和DnaC三种蛋白质共同参与解链作用，其中DnaB为解螺旋酶；③单链DNA结合蛋白(SSB)维持解链的DNA在单链状态以利核苷酸掺入；④NTP和DnaG(引物酶)分别作为原料和酶催化RNA引物的合成；⑤dNTP和依赖于DNA的DNA聚合酶DI分别作为底物和催化DNA聚合；⑥DNA聚合酶Ⅰ催化RNA引物的切除，合成DNA填补空隙；⑦DNA连接酶催化随从链中相邻冈崎片段的连接；⑧DNA拓扑异构酶I和n，松解DNA螺旋时下游的打结现象。
53．大量食用生鸡蛋清为什么会造成体内生物素缺乏？
答:生物素广泛分布于动植物组织中、肠道细菌亦能合成、故不易发生生物素缺乏症。但因为生鸡蛋清中含在抗生物素蛋白、它能与生物素结合成无活性又不易吸收的物质。鸡蛋加热后这种蛋白被破坏、也就不再妨碍生物素的吸收。
54．酶的专一性分哪几种(举例说明)？
答:酶的专一性可分为绝对专一性、相对专一性和立体异构专一性。其中，相对专一性又分为基团专一性和键专一性；立体异构专一性又分为旋光异构专一性、几何异构专一性。
(1)绝对专一性：是指酶只能催化一种化合物发生反应，如脲酶催化尿素分解为氨和二氧化碳。
(2)相对专一性：是指酶能催化一类物质发生反应。如蛋白酶、淀粉酶等。
基团专一性：酶能催化一类基团参与反应，如胰蛋白酶能催化碱性氨基酸羧基形成的肽键。
键专一性：酶能催化一类化学键发生反应，如蔗糖酶催化
，
，
糖苷键。
(3)立体异构专一性：酶能催化异构体中的种发生反应。
旋光异构专一性：酶能催化旋光异构体中的一种，如乳酸脱氢酶催化
乳酸脱氢，对
乳酸不起作用；
几何异构专一性：酶能催化顺反异构体中的一种，如烯脂酰CoA水化酶催化反式烯脂酰CoA加水生成
羟脂酰CoA。
55．什么是糖蛋白？糖蛋白的多糖链与蛋白质多肽链通过哪些方式连接？
答:由糖与多肽或蛋白质以共价键连接而成的结合蛋白称为糖蛋白。以蛋白质为主，其上糖链不呈现双链重复序列，多糖链与多肽链通过糖肽链相连。主要有①O连接：由单糖的半缩醛羟基与丝氨酸/苏氨酸残基的羟基缩合而成，其形式如(糖)
(肽)。②N连接：单糖的半缩醛羟基与天冬酿胺或赖氨酸的氨基缩合而成，其形式如(糖)
(肽)。
56．用阳离子交换树脂分离核苷酸时，核苷酸被洗脱的先后顺序是
而不是UMP→GMP→AMP→CMP。为什么？
答:离子交换树脂分离核苷酸主要是根据它们与树脂上相反电荷的静电结合力的不同，以及核苷酸疏水的碱基环与树脂骨架之间非极性吸附力的差异进行的。据理，用阴离子交换树脂分离这4种核苷酸时，按照它们解离的差异，应该是AMP在CMP之前被洗脱下来。但是，由于两种碱基与交换树脂的非极性吸附力不同，嘌呤环比嘧啶环大3倍，这就抵消了它们之间的电荷差异，因此核苷酸被洗脱的先后顺序是UMP→GMP→CMP→AMP。
57．简述胆汁酸肝肠循环及其生理意义。
答:胆汁酸是脂类食物消化必不可少的物质，是机体内胆固醇代谢的最终产物。初级胆汁酸随胆汁流入肠道，在促进脂类消化吸收的同时受到肠道(小肠下端及大肠)内细菌作用而变为次级胆汁酸，肠内的胆汁酸约有95%被肠壁重吸收(包括主动重吸收和被动重吸收)，重吸收的胆汁酸经门静脉重回肝脏，经肝细胞处理后，与新合成的结合胆汁酸一道再经胆道排入肠道，此过程称为胆汁酸的肝肠循环。胆汁酸体内含量3〜5g，餐后即使全部倾入小肠也难达到消化脂类所需的临界浓度，然而由于每次餐后都可进行2〜4次肝肠循环，使有限的胆汁酸能最大限度地发挥作用，从而维持了脂类食物消化吸收的正常进行。
58．分离蛋白质的几种层析法及原理。
答:凝胶过滤层析:凝胶过滤又叫分子筛层析，其原因是凝胶具有网状结构，小分子物质能进入其内部，而大分子物质却被排除在外部。当一混合溶液通过凝胶过滤层析柱时，溶液中的物质就按不同分子质量筛分开了。
离子交换层析:离子交换层析是在以离子交换剂为固定相、液体为流动相的系统中进行的。离子交换剂是由基质、电荷基团和反离子构成的。离子交换剂与水溶液中离子或离子化合物的反应主要以离子交换方式进行，或借助离子交换剂上电荷基团对溶液中离子或离子化合物的吸附作用进行。
吸附层析:吸附柱层析是利用吸附剂做固定相，利用混合试样各组分对吸附剂表面吸附能力差异和在流动相中溶解度差异来进行分类分析的方法。
亲和层析:生物分子间存在很多特异性的相互作用，它们之间都能够专一而可逆的结合，这种结合力就称为亲和力。亲和层析就是通过将具有亲和力的两个分子中一个固定在不溶性基质上，利用分子间亲和力的特异性和可逆性，对另一个分子进行分离纯化。
疏水层析(反相HPLC):是根据不同的生物大分子疏水性的强弱而达到分离纯化的目的。蛋白质表面一般有疏水与亲水集团，疏水层析是利用蛋白质表面某一部分具有疏水性，与带有疏水性的载体在高盐浓度时结合。在洗脱时，将盐浓度逐渐降低，因其疏水性不同而逐个先后被洗脱而纯化，可用于分离其他方法不易纯化的蛋白质类药物。
59．简述酶法分析的主要特点和类型。
答:酶法分析的特点：①适用范围:酶、底物、辅酶、激动剂、抑制剂；②专一性极高，原则上允许类似物共存；③灵敏度很高，检出限量
，如与荧光法结合可达
；④精确度较好，与仪器误差和组合方法有关；⑤分析速度快，酶反应本身多在30分钟内完成，一般不需预处理；⑥简便性较差，必须有酶分析操作的专门训练。
酶法分析主要有三类测定法。
(1)终止反应法:系在恒温反应系统中进行反应，间隔一定时间，分几次取出一定体积的反应液，即刻中止反应，然后分析底物、产物、辅酶、激动剂或抑制剂的变化量。操作中，在分析酶活性时，底物浓度应大于酶浓度；在以酶为工具对底物、辅酶、激动剂或抑制剂进行分析时，则所用酶量应大于待测物质的量。底物浓度与反应速度之间呈线性关系的范围，即为
值以上，在这个范围可依据反应速度来测定底物浓度。
(2)连续测定法:此法不需要取样终止反应。而是基于反应过程中光吸收、气体体积、酸碱度、温度、黏度等的变化用仪器跟踪监测、计算酶活性或待测物质的浓度。
(3)循环放大分析法:循环具有化学性放大作用，理论上可无限放大其分析灵敏度，目前已可准确定量
的生化物质。本法包括三个步骤:①转换反应：以试样中的待测组分为底物，经特异反应生成与待测组分相当的定量循环底物；②循环反应:生成的循环底物反复参加由两个酶反应组成的偶联反应，所得产物量为循环底物的若干倍；③指示反应:以酶法分析反应产物量。由反应产物量及循环次数(时间)，计算循环底物量，再推算试样中待测组分的量。
60．真核生物中的转录后加工过程有哪些？各自意义是什么？
答:真核生物核内转录首先生成的hnRNA在生物体内必须经过加工成为成熟的mRNA分子，才能用作蛋白质合成的模板。主要过程如下：
(1)
加帽。hnRNA合成的第一个碱基一般是三磷酸嘌呤核苷(Pu)，在酶的作用下，与GTP反应形成甲基化三磷酸鸟苷的帽子结构(mGpppPu)，保护mRNA不被磷酸酶和核酸酶降解。
(2)3´加尾。转录完成后，在多聚核苷酸酶的作用下，以ATP为底物，加上多聚腺苷酸的尾巴，这个过程可在核内或核外完成，有助于核酸的稳定。
(3)剪接反应。将hnRNA中内含子序列切除，通过磷酸酯转移反应将两个外显子连接到一起。
(4)mRNA分子内部甲基化及mRNA编辑。
转录初始生成的rRNA前体和tRNA前体也必须经过加工才能成为成熟的rRNA分子和tRNA分子。如将rRNA的前体切割，形成所需大小的RNA片段。将tRNA前体中的内含子
经剪接反应去除，两端切断、末端修剪、末端添加氨基酸臂等，tRNA中稀有碱基的生成也是转录后加工完成的。rRNA和tRNA在成熟过程中都发生碱基或核糖的甲基化反应。
61．以乳酸脱氢酶为例说明同工酶如何组成及其意义。
答:乳酸脱氢酶是四聚体，有两种亚基：M型(骨骼肌型)和H型(心肌型)，组成催化相同化学反应的五种酶即同工酶：
(
)
、
(—
)
、
(
)
、
(
)
和
(
)
。它们的分子结构和理化性质不同，最早就是从它们在电泳速度上的不同而被发现。虽说催化相同化学反应，但
对乳酸亲和力高，有利于生成丙酮酸进入有氧代谢供能，
对丙酮酸亲和力高，有利于乳酸的生成，前者见于心脏，后者见骨骼肌，甚有生理意义。
62．假设前期实验发现苯甲酸可能通过蛋白质X活性中心的K150、L200与蛋白质X相互作用，现在导师希望你通过定点突变来验证这一相互作用确实与K150、L200直接相关，请提出你的实验方案(定点突变技术可省略，但要说清楚突变的方案、预计的实验结果并给出合理解释)。
答:K150即赖氨酸、L200为亮氨酸。突变时可以考虑分别将K150突变为酸性氨基酸、中性氨基酸;将L200突变为酸性氨基酸、碱性氨基酸；以及K150、L200的单独突变和组合突变来验证苯甲酸与蛋白质X的相互作用对这两个位点的依赖性。
63．请列出两条跨膜细胞信号转导的途径。
答:两条跨膜信息转导途径：①cAMP-蛋白激酶途径：信号分子→膜受体→G蛋白→腺苷酸环化酶→cAMP(第二信使)→蛋白激酶(PKA) →靶蛋白→生物学效应。②
依赖性蛋白激酶途径：信号分子→膜受体→G蛋白→磷脂酶C→IP3和DAG(第二信使)→
→
→生物学效应；
→PKC→耙蛋白→生物学效应。
64．什么是生物膜的相变温度，其温度高低与幅度取决于哪些因素？
答:(1)生物膜的相变温度是指生物膜从液晶态转变为似晶态的凝胶状态时的温度。
(2)①相变温度本身取决于膜脂的组成，组成膜脂的脂酰链越短或者是不饱和程度越高，其相变温度越低。此外，头部基团的极性对膜的相变温度也能产生明显的影响，例如：ethanolamine头部基团比choline头部基团具有更高的相变温度。
②胆固醇能够影响膜的流动性，但它本身并不是改变膜的相变温度，由于它分子中刚性的类固醇环干扰了其他膜脂分子脂肪酸侧链的运动，反而使得膜的相变温度明显的变宽，因此，胆固醇通过固定在磷脂分子中间而抑制了膜的液晶态运动。
65．画出DNA复制过程中的复制叉，标出复制所需的各种酶和辅因子，并简述各种酶和辅因子的功能。
答:复制叉：
一些酶和辅因子的功能：解链酶或解链蛋白——解开DNA双链；拓扑异构酶或解螺旋酶——解开双螺旋；单链结合蛋白——稳定已解开的DNA单链；RNA聚合酶或引发体——生成复制所需的RNA引物；DNA聚合酶——生成和延伸DNA链；DNA连接酶——连接冈崎片段等。
66．羊毛衫等羊毛制品在热水中洗后在电干燥器内干燥，则收缩。但丝织品进行同样的处理，却不收缩。如何解释着两种现象？
答:(1)羊毛由
角蛋白组成，
角蛋白有两条多肽链，相互盘绕，每条多肽链的主要结构单位是连续的
螺旋圈，其螺距为5.4,该结构使得
角蛋白具有很好的弹性。当羊毛织成羊毛线时，外力会对
角蛋白进行一定程度的拉扯，使得其
螺旋可能延展为
折叠。而在水洗时，这在水分子的帮助下，多肽链重新由
折叠转化为
螺旋，所以羊毛衫收缩了。
(2)丝织品中的主要成分是丝心蛋白，它主要是由呈现
折叠构象的多肽链组成的，丝中的
折叠含有一些小的、包装紧密的氨基酸侧链，所以比羊毛中的
螺旋更稳定，水洗和干燥其构象基本不变。
67．简述常用物质代谢的研究方法。
答:物质代谢研究方法可以归纳为两大类，即体内法和体外法，或称整体法和离体法。
①利用正常机体的方法;②使用病变动物法;③器官切除法;④离体组织器官方法;⑤组织切片或匀浆法;⑥酶及其抑制剂法;⑦同位素示踪法;⑧使用亚细胞成分的方法;⑨致突变法;⑩分子生物学技术等。
68．与原核生物相比，真核生物基因组有哪些特点？
答:与原核生物相比，真核生物基因组有如下特点：①基因组很大，人类的为
，并且与组蛋白组成染色体存在于胞核中。②基因是不连续排列的，由内含子和外显子间隔排列；转录后要剪去内含子，连接外显子，③转录产物为单顺反子，即1个编码基因转录生成1个mRNA分子，翻译为1条多肽链。④具有十分可观的重复序列，高度重复的可达
次，中度重复的也在
次。
69．根据结构与催化机制(而不是根据被驱动的离子类型)，说出三类驱动离子的ATP酶名称。
答:三类驱动离子的ATP酶，即P型泵、F型泵和V型泵。它们的基本功能是通过水解ATP提供的能量转运离子，或是通过离子梯度合成ATP。P型泵或P型ATPase，运输时需要磷酸化，包括
泵，
泵；V型泵或V型ATPase，主要位于小泡的膜上，如溶酶体膜中的
泵，运输时需ATP供能，但不需要磷酸化；F型泵或F型ATPase，这种泵主要存在于细菌质膜、线粒体膜和叶绿体膜中，它们在能量转换中起重要作用，是氧化磷酸化或光合磷酸化偶联因子。F泵工作时不消耗ATP，而是将ADP转化成ATP，但是它们在一定条件下也会具有ATPase活性。
70．简述真核mRNA和原核mRNA的结构特点和不同之处。
答:真核细胞mRNA是单顺反子mRNA，大多数真核细胞
末端有一段长约200bP的多聚腺苷酸(poly A)，是以无模板的方式添加的，
末端有一帽子结构；原核生物mRNA为多顺反子mRNA，
末端无多聚腺苷酸，
末端也无帽子结构。
71．从代谢的角度简要分析哪些物质在什么情况下会引起酮血或酮尿？
答:酮血或酮尿是指血液或尿中酮体的浓度超出正常范围。正常情况下，肝外组织氧化酮体的速度很快，能及时除去血中的酮体。但在糖尿病时糖利用受阻，或者长期不进食，机体所需能量不能从糖的氧化获得，于是脂肪被大量动员，肝内脂肪酸被大量氧化，生成大量乙酰CoA，而因为无法从糖代谢补充柠檬酸循环所需的4C化合物，乙酰CoA不能进入柠檬酸循环完全氧化，只能合成大量酮体，超出了肝外组织所能利用的限度，血中酮体堆积，即形成酮血，大量酮体随尿排出，即形成酮尿。
72．真核生物染色体的线性复制长度是如何保证的？
答:真核生物线性染色体的两个末端具有特殊的结构，称为端粒(telomere)，它由许多成串短的重复序列组成，具有稳定染色体末端结构、防止染色体间末端连接和补偿复制过程中滞后链
端引物RNA被水解
留下的空缺，因端粒酶可外加重复单位到端上，以维持端粒的长度。
端粒酶是一种含有RNA链的逆转录酶，它能以所含的RNA为模板来合成DNA的端粒结构。其中RNA链通常含有1个半拷贝的端粒重复单位的模板。
端粒酶可结合到端粒的
端上，RNA模板的
端识别DNA的
端碱基并相互配对，以RNA链为模板使DNA链延伸，合成一个重复单位后酶再向前移动一个单位。真核生物就是依靠端粒酶的这种爬行复制保证线性染色体的复制长度。
73．凝胶过滤和超过滤都是蛋白质分离纯化过程中常用的技术。它们有无共同之处？试述它们两者的原理和操作。
答:凝胶过滤和超过滤的是两种性质不同、用处也不同的蛋白质制备方法，其原理和操作见下。
凝胶过滤是根据蛋白质分子的大小，将样品中的各种蛋白质分子分开。具体操作是将样品通过装有一定规格凝胶的过滤柱，小分子的蛋白质进人凝胶孔内，大分子的蛋白质留在外面，然后洗脱液洗脱，蛋白质依分子大小被洗脱，大分子先被洗脱，然后是小分子的蛋白质。
超过滤是利用蛋白质分子不能穿过半透膜的特性除去蛋白质混合物中的小分子物质。具体操作是将样品装人透析袋然后利用高压或离心力，迫使蛋白质样品中的非蛋白的小分子溶质通过半透膜，而蛋白质留在透析袋内。
74．有一份核酸样品，可能混有少许蛋白质，只允许定性测定一种元素即可确定其有无蛋白质污染，你选择哪种元素，为什么？
答:确定有无蛋白质污染，只需测定样品中是否含有只存在于蛋白质而不存在于核酸的元素，如果样品有此元素存在，很明显说明存在蛋白质污染，满足此条件的是硫(S)，核酸一般不含硫，而大多数蛋白质含有硫。
75．激素可分为水溶性激素(如肾上腺素)和脂溶性激素(如固醇类激素)。大部分水溶性激素不进入到靶细胞里面，而是通过作用于细胞表面的受体发挥它的效应；脂溶性激素不仅进入靶细胞，而且是在细胞核内发挥作用。两类激素作用的模式与它们的溶解性、受体位置有什么相关性？
答:水溶性激素不易穿过细胞膜，所以它与靶细胞表面的受体结合，激发细胞内的第二信使(如cAMP)形成，通过第二信使发挥作用；由于脂溶性激素可以通过细胞膜进入细胞内，与细胞内受体结合，作用于DNA，影响基因表达。
76．简述乙酰CoA的来源与去路。
答:乙酰CoA是糖、脂、氨基酸代谢共有的重要中间代谢物，也是三大营养物代谢联系的枢纽。乙酰CoA的生成:糖有氧氧化;脂酸
氧化;酮体氧化分解；氨基酸分解代谢;甘油及乳酸分解。乙酰CoA的代谢去路:进入三羧酸循环彻底氧化分解，体内能量的主要来源;在肝细胞线粒体生成酮体，为缺糖时重要能源之一;合成脂肪酸;合成胆固醇;合成神经递质乙酰胆碱。
77．通常以DNA中的G、C含量来描述其分子特征。
(1)当DNA分子一条链中的(A+G)/(T+C)比例为0.7时，试回
答:
①此DNA分子另一条链(即互补链)中的(A+G)/(T+C)比例是多少？为什么？
②整个DNA分子中的(A+G)/(T+C)的比例是多少？为什么？
(2)当DNA分子一条链中的(A+T)/(G+C)比例为0.7时，试回答:
①此DNA分子另一条链(即互补链)中的(A+T)/(G+C)比例是多少？为什么？
②整个DNA分子中的(A+T)/(G+C)的比例是多少？为什么？
答:(1)设DNA的两条链分别为
和
，那么：
,
；
,
因为，
所以，互补链中
(2)在整个DNA分子中，因为A=T，G=C
所以，
，
(3)假设同(1)，则：
所以，
(4)在整个DNA分子中
78．当胞浆中脂肪酸合成量盛时，线粒体中脂肪酸氧化就会停止，为什么？
答:主要是因为脂肪酸合成产生出的丙二酸单酰
可以抑制肉碱脂肪酰转移酶
的作用，这样长链的脂酰CoA就不能转入到线粒体中，当脂肪酸的合成旺盛时，胞浆中的丙二酸单酰
的含量就会很多，脂酰CoA被阻断在胞浆中，所以
氧化就不能进行。
79．概述在肝、肾等组织内进行的转氨基偶联氧化脱氨作用的特点。
答:转氨基
氧化脱氨作用有下列特点：
(1)偶联的顺序:对多数氨基酸的脱氨作用，一般先转氨基，然后再氧化脱氨。
(2)转氨基作用的氨基受体是
酮戊二酸:因为氧化脱氧时，
谷氨酸脱氢酶的活性高而特异性强。只有
酮戊二酸作为转氨基作用的氨基受体，才能生成谷氨酸。而其他
酮酸虽可参与转氨基作用，但它们生成的相应氨基酸因缺乏适当的酶，而不易进一步氧化脱氨。
由于L-谷氨酸脱氢酶在肝、肾、脑中活性最强，因此联合脱氨作用主要是在肝、肾等组织内进行得比较活跃，这些组织中氨基酸可通过此方式脱氨。
80．核酸定磷法为什么要用强酸进行消化？有什么方法可以表明消化完全？
答:(1)用强酸进行消化，使核酸分子中的有机磷消化成无机磷。
磷的测定方法很多，Fiske-Subbarow定磷法是一经典的、至今仍被经常采用的方法，它具有灵敏、简便的特点。各种含磷有机物经硫酸或过氯酸水解，使有机磷消化成为无机磷。无机磷在酸性条件下，与钼酸盐(常用钼酸铵或钼酸钠)反应生成磷钼酸盐络合物。用还原剂处理，磷钼酸盐络合物被还原生成钼蓝，在660nm处有最大光吸收峰。在一定浓度范围内，颜色的深浅与磷含量成正比关系。因此可应用分光光度法进行磷的定量测定。
(2)取30ml凯氏烧瓶2只，I、Ⅱ依次编号，I号瓶为空白对照，用刻度吸管准确吸取核糖核酸样液1.0ml，置于Ⅱ号凯氏烧瓶内，I号瓶加入蒸馏水1.0ml，不加样液，两瓶分别加入
硫酸1.0ml置消化架用小火加热消化，待溶液呈褐色，稍加冷却，加入2mol/L硝酸2滴，再继续加热，直至逸出白色烟雾，溶液无色透明，表示消化完成时为止。(方法和凯氏定氮法一样，都是将有机的转为无机的，再测量。)
81．简述糖蛋白寡糖链的主要功能。
答:糖蛋白寡糖链的功能大致有三个：①寡糖链可保护肽链难以被水解，延长其半衰期；②寡糖链参与肽链的折叠和维持蛋白质的空间结构；③寡糖链的识别作用：寡糖链单糖间连接方式复杂，结构多样，因而在分子识别上起重要作用。这种识别作用与抗体-抗原、激素-受体、酶促反应等相关。
82．简述生物膜的流动性，并简述磷脂中脂肪酸对于流动性的作用，以及胆固醇对于膜流动性的影响，用试验证明蛋白质的流动性。
答:(1)膜的流动性是指膜脂和膜蛋白的运动状态。膜脂的流动性主要决定于磷脂，膜蛋白的分子运动主要有侧向扩散和旋转扩散两种运动方式。在生理条件下，磷脂大多成液晶态。有以下几种运动方式：①在膜内作侧向扩散或侧向移动；②在脂双层中作翻转运动；③磷脂烃链围绕
键旋转而导致异构化运动；④围绕与膜平面相垂直的轴左右摆动；⑤围绕与膜平面相垂直的轴做旋转运动。
(2)脂肪酸链所含双键越多越不饱和，使膜流动性增加；长链脂肪酸相变温度高，膜流动性降低。
(3)胆固醇的含量增加会降低膜的流动性。
(4)漂白荧光恢复法可以证明蛋白质的侧向扩散，具体做法：用荧光标记的抗体与细胞膜上的抗原反应，使细胞膜带有荧光，用紫外线照射，使一侧细胞的荧光淬灭，放置一段时间后会发现荧光物质又均匀分布在细胞表面。
